Detection of respiratory syncytial virus A and B and parainfluenzavirus 3 sequences in respiratory tracts of infants by a single PCR with primers targeted to the L-polymerase gene and differential hybridization.

Una transcripción reversa-PCR e hibridación-inmunoensayo enzimático (RT-PCR-EIA) ha sido desarrollado para identificar los principales agentes de la bronquiolitis en bebés: virus respiratorio sincitial A y B (ASVR y RSVB) y parainfluenzavirus 3 (PIV3). Se seleccionaron dos grupos de cebadores (P1-P2 y P1-P3) en una región conservada del gen de la polimerasa L. En cultivos celulares infectados, este método detecta ASVR (n = 14), RSVB (n = 13), y PIV3 (n = 13), con la exclusión de PIV1 (n = 4), PIV2 (n = 3), el virus del sarampión (n = 6), virus de las paperas (n = 4), virus de influenza A (n = 11), y virus de la gripe B (n = 4). La diferenciación de los amplicones de polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción (RFLP) mostró un sitio PvuII para las cepas de PIV3 y un sitio AvaII para las cepas de RSV, con ASVR distinguirse de RSVB por BglII. La hibridación-EIA, utilizando tres sondas internas específicas para cada virus, correlacionados con el ensayo de inmunofluorescencia (IFA) y los resultados de RFLP. aspirados clínicas de 261 niños hospitalizados con bronquiolitis fueron probados por IFA, técnica de aislamiento viral (VIT), y RT-PCR-EIA. RT-PCR-EIA detecta secuencias de RSV en 103 muestras (39,4%), e IFA-VIT detecta secuencias de RSV en 109 casos (41,7%). Unos muestras (2,6%) fueron IFA-VIT positivo pero PCR negativo, y una muestra fue de RT-PCR-EIA único positivo. RT-PCR-EIA detecta secuencias VPI3 en 14 de los 15 aislamientos de IFA-VIT-positivos. Los dos métodos demostraron muy buena correlación (96.9%), pero RT-PCR-EIA fue claramente más eficiente en la tipificación, dejando 5% no-A, no-B aislados, mientras IFA no resolvió 23% de los aislamientos. Los dos métodos se contradecían entre sí por <5% de los aislamientos.