Rapid diagnosis of bacterial meningitis by real-time PCR and fluorescence in situ hybridization.

PCR en tiempo real y la hibridación in situ fluorescente (FISH) fueron evaluados como métodos rápidos para el diagnóstico de la meningitis bacteriana y se comparan con los procedimientos de diagnóstico estándar. Para la PCR, se eligió un enfoque LightCycler, la implementación de los ensayos de PCR eubacterial y específicos para las bacterias más relevantes. Para FISH, una sonda conjunto similar que contiene sondas eubacterial y específicas se compone de sondas publicados y de nuevo diseño. Ambos métodos se evaluaron mediante el uso de líquido cefalorraquídeo (LCR) muestras de pacientes con sospecha de meningitis bacteriana. Para todas las muestras microscopy- y con cultivo positivo (n = 28), la PCR eubacteriana fue positiva. Además, todos los patógenos identificables se detectaron con ensayos de PCR específicos, de acuerdo con un algoritmo basado en la tinción de Gram. El método FISH detecta el patógeno en 13 de 18 muestras positivas. Mientras que el método FISH siguió siendo negativo para todas las muestras microscopy- y con cultivo negativo (n = 113), la PCR eubacterial fue positivo para cinco de estas muestras. La secuenciación del amplicón reveló la presencia de Neisseria meningitidis, Streptococcus agalactiae, y Haemophilus influenzae en tres de estas cinco muestras. Además, las muestras con resultados discordantes por la cultura y microscopía fueron investigados con éxito por PCR (10 muestras) y FISH (5 muestras). En conclusión, la PCR es una herramienta altamente sensible para el diagnóstico rápido de la meningitis bacteriana. FISH es menos sensible pero es útil para la identificación de muestras de LCR que muestran las bacterias en la tinción de Gram. En base a los resultados, se discute un enfoque para el diagnóstico de laboratorio de la meningitis incluyendo PCR y FISH.